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兔波氏杆菌病的实验室诊断

兔波氏杆菌病又称为支气管败血波氏杆菌病，引起兔的一种以慢性鼻炎、支气管肺炎及咽炎为特征的呼吸道传染病。

1　病原学诊断

1.1　细菌培养

样品采集：病兔，将灭菌棉拭子在无菌生理盐水中浸湿，插入病兔鼻腔内，深约10mm，小心转动，蘸取鼻汁；死亡兔或扑杀致死兔，取鼻腔、气管、肺部病变材料用于细菌分离培养。

细菌分离：将附着在棉拭上的黏液涂抹在麦康凯培养基或DHL培养基上，37℃培养48h。肺部病变材料进行培养时，还可用血液琼脂培养基。

结果判定：在改良麦康凯培养基上，支气管败血波氏杆菌菌落直径约1~2mm，圆整、光滑、隆起、透明，略呈茶红色，较大菌落中心厚，呈茶黄色。在DHL琼脂平皿上形成无色半透明，2mm左右菌落。

1.2　病原鉴定

生化试验:不发酵碳水化合物，葡萄糖、荒糖、乳糖、甘露醇、果糖木糖呈碱性反应。M.R.试验、靛基质试验、硫化氢产生阴性，V-P试验、枸橼酸盐利用、尿素酶产生、硝酸盐还原、运动力试验阳性。

动物接种试验:常选用幼兔或豚鼠，鼻内接种4h培养物0.1mL，应在几天内出现鼻炎和肺脓肿的典型症状和病理变化。0.5mL剂量耳静脉接种家兔，应于24~48h内死亡。从死亡兔的病变组织及扑杀的活兔的肺脏中均可分离到本菌。

血清平板凝集反应:在清洁的玻片上加一滴阳性血清（约0.3mL），充分混入一铂圈被检菌，轻轻晃动玻片，室温下放置2min。液滴中出现大凝集块或小的粒状凝集物，液体透明，判为阳性。每次试验应设有阴性血清对照和缓冲生理盐水对照。结果判定：液滴中出现大凝集块或小的颗粒状凝集物，液体透明，判为阳性。

免疫荧光检测抗原:应用直接荧光抗体技术，检查鼻甲骨、气管、细支气管及肺脏上皮细胞，观察到颗粒样抗原者判为阳性。该试验一般在感染后7~28天即可检出抗原。

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2.　血清学诊断

2..1　凝集反应

将Ⅰ相菌接种到胰蛋白酶大豆肉汤中，37℃培养24~48h，加福尔马林灭活，作为抗原。取凝集抗原与系列稀释的被检血清等量混合，37℃　2h或56℃　30min。4℃作用1夜判定。结果为1∶10被检血清呈现明显颗粒状凝集者判为阳性。家兔在感染后2~4周，即可从血清中测出凝集抗体。

2..2　免疫扩散试验

抗原制备:将Ⅰ相菌接种在含绵羊鲜血的鲍-姜琼脂培养基上，37℃潮湿温箱中培养36h，向生长良好的Ⅰ相菌培养物中加入缓冲生理盐水，充分振荡后，使菌体分散于溶液中而制成悬液，其菌数为2500亿/mL，再添加福尔马林使其含量为0.37%（甲醛0.15%），摇匀，瓶口加盖胶塞，放置37℃温箱（大约18~20h），次日取出，放室温3~5天，每天振荡3次。以500~1000转/min离心沉淀20min，弃上清液；缓冲盐水洗涤沉淀物，12000~15000转/min离心20min，弃上清液；向沉淀加少量缓冲盐水，按万分之一比例加入硫柳防腐。采用辐射免疫扩散法（将其8倍沉淀抗体滴度的抗血清，按10%比例加入到1%琼脂糖Tris缓冲溶液中，制成反应板，然后打孔，室温下湿室作用即可）测定，在反应板上出现直径10mm±1mm明显沉淀者为合格抗原。分装后4℃保存。

阳性血清制造:将上法接种于鲍-姜氏培主基上的Ⅰ相菌用灭菌PBS洗下，记数后加入福尔马林灭活，耳静脉注射3~6月龄的经支气管败血波氏杆菌免疫扩散法检查阴性的健康家兔，每只兔1mL。次菌数为100万/mL，以后每周加强免疫1次，每次菌数递增10倍，计6次。一次注射后4~5天采血，用免疫扩散法测定抗体滴度在8倍以上为合格，第七周自心脏采血，无菌收集血清。

免疫扩散试验配制:0.7%~1.0%的琼脂糖Tris反应板，按试验方法打孔，并在相应孔中加入抗原或血清。室温下湿室中作用，第二天开始判定，逐日观察记录结果，3天后判定。抗原孔与被检血清孔之间形成一条致密的沉淀线并且其末端与毗邻的阳性血清孔与抗原之间的沉淀线相融合者判为阳性，阳性血清与抗原孔之间的沉淀线末端相毗邻的被检血清孔之抗原方向偏弯者亦判为阳性。观察时可借助灯光或自然光源，特别是弱反应须在强烈的日光灯光源照射下才能看清沉淀线。

采用本法检查时，家兔被支气管败血波氏杆菌感染后7~10天即可检出血清抗体，血清中沉淀抗体的存留期在1年以上。本法与细菌分离的符合率在95%左右。

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如何提高獭兔皮毛质量

獭兔贵在毛皮，当前獭兔生产的突出问题是优质皮太少，三等皮、次皮滞销，影响獭兔场的生存与发展，以致经济效益低下。一般来说，养殖场造成獭兔皮张质量差异有以下主要六条主要因素：

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一是品系差。不同的品系皮张质量不同。一般来说，美系獭兔的被毛密度较低，毛较短，皮较薄；德系獭兔的被毛密度大，毛纤维较长；法系獭兔居中。

二是个体差。同一品种内个体的差异较大，这种差异甚至超过品系间的差异。

三是季节差。在不同的季节里，兔皮质量也有较大的差异。

四是月龄差。5～6月龄兔皮是成熟的兔皮。少于5月龄，兔皮不成熟；超过6月龄，獭兔进入季节性换毛，差异较大。

五是地区差。习惯上将产于长江以南的皮张称作南皮，将长城以北生产的皮张称作北皮，在南北之间地带生产的皮张称作中皮。一般来说，北皮，中皮次之，南皮最差，但这不是的。

六是营养差。以不同营养水平的饲料饲喂相同的品系，皮张质量有很大的差异。

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采用优化杂交组合技术：其一是注意选育优良的兔种，以繁育出大量的后代，从而生产出高质量的皮张。其二是采取系间杂交，国内目前饲养的獭兔主要有美系、德系和法系。从繁殖力来看，以美系獭兔成绩，德系；从生长速度来看，德系獭兔的生长潜力。可以用美系獭兔作为代母本，用德系或法系獭兔作为代父本进行杂交；再用杂交一代的母兔作为第二代母本，与第二代父本德系獭兔进行杂交，用三元杂交后代直接进行育肥。经大量生产实践证明，其生产效果均优于纯种獭兔繁殖的后代。

饲喂全价饲料，饲喂要科学：在獭兔的育肥期内，除了满足其能量、蛋白质、纤维素等主要营养成分的需求外，还应使用饲料添加剂。如稀土元素、腐质酸添加剂、抗氧化剂、酶制剂、微生态制剂等，它们对獭兔的健康生长和皮板质量的提高均有一定的效果。要想生产出理想的獭兔皮，饲料营养是关键因素，因此，饲喂全价颗粒饲料。

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预防及治疗獭兔癣病：无病兔群严禁从有病兔群引入种兔，患有本病的人不准接近家兔，定期防鼠和灭鼠。獭兔一旦患有癣病，必须及时治疗。治疗方法：由须发癣菌、石膏状小孢霉引起的疾病，用灰黄霉素治疗有较好的效果，按每千克体重25毫克制成水悬剂，每日口服，连用14天。群体治疗可在每千克精料中加入0.375克粉状灰黄霉素，连喂14天。患部剪毛，用0.1%新洁尔洗净患部，可用5%碘酊、10%水杨酸软膏、3%克霉唑软膏等涂擦患部，连用1周。

提供适宜的生活环境：兔舍的温度保持在25℃左右；湿度可控制在55%～65%；舍内饲养密度一般不应过高，应实行小群饲养，可使被毛光洁明亮。

要抓好獭兔早期增重：獭兔被毛毛囊的分化与体重的增长呈正比。即体重越大，毛囊的密度则越大。因为毛囊的分化主要在早期，所以，应当抓好断奶幼兔的体重增长。长期的生产实践证明，獭兔在3月龄之前不间断的生长，这对提高商品獭兔被毛的品质、獭兔体重和皮板面积是非常有效的。

采取前促后控措施：獭兔从断奶到3月龄或3.5月龄这一段时间，在饲养上一定要注意保证獭兔的营养水平，让獭兔自由采食，要充分利用其早期生长发育速度快的这一特点，挖掘其生长的遗传潜力，让幼兔多吃快长。此后要适当控制其生长速度。控制生长速度的方法一般有两种：一是控质法，二是控量法。前促后控的育肥技术不仅可以节约饲料，降低饲养成本，而且还可以使育肥兔的皮张质量好，皮下不会有多余的脂肪和结缔组织。

公兔要适时去势：公兔的去势时间，一般选在2.5～3月龄时进行，以刀骟法最为实用。

适时出栏：一般在正常情况下，当兔满5月龄、体重达到2.5～3千克时即可出栏。淘汰后备兔或种兔，应当避开春季的3～5月和秋季的9～11月，选在冬季淘汰。

重视兔皮加工：獭兔贵在毛皮，当前獭兔生产的突出问题是优质皮太少，三等皮、次皮滞销，影响獭兔场的生存与发展，因此要克服“重种轻皮”观，适时取皮，不取换毛皮，严格按照剥制程序“处死—剥皮（撑皮）—放血”操作，一环扣一环，防止因宰剥保管不当影响獭兔皮的质量。

 随着免业养殖模式的深度变革，以庭院 式小规模、副业型、低效益的传统养兔逐渐被快速普及推广的规模化饲养、工厂化管理、效益型工厂化养殖所替代。而工厂化养殖的基础条件之一，是必须有较高标准的兔舍和新式(欧式)笼具的配套使用。在最近几年生产和安装实践中，笔者认为新型兔舍和新式笼具配套使用必须遵循以下原则。

1 ; 控温控湿

      传统的庭院式养兔， 一般使用的笼具基本上不具备自动清粪的功能，且繁殖与育肥大部分是分开的，旧房利用和临时搭建的大棚不具备控温条件。现在我们学习和借鉴欧州先进的饲养理念，每栋兔舍每套笼具都同时具备繁殖和育肥的双重功能，兔舍轮换使用，循环清空消毒，实施人工授精，温度控制,灯光照射，药物、集中产仔，定时全进全出，既稳定了正常的生产指标，提高了饲养效率，又通过封闭消毒防控了各类疾病的发生。正因为如此，舍内温变调剂就尤其重要。2013 年，四川金富现代农业有限公司陈红等4位 专家在《温度对家兔的影响及其控制》一文中,对温度对家兔的五大影响(体温、生长、繁殖、疾病、皮毛)都作了详尽的分析，常年舍温的控制值为15-25°C,这就要求我们为了便于控温，在兔舍的选址上就应注意地势高燥平坦、背风向阳、地下水位低、排污方便、远离车来人往和声音嘈杂的交通道口和人群密集区，特别要考虑，冬夏两个季节，在小免密集繁殖产仔时，室内低于8°C的区域,必须配人工增温设施，夏季室内超过28°C,在负压降温的环境中，风机和湿市同时开放的时间自然延长，按照幼免 和成年兔不同时期对温度的适应程度适时调剂, 做到平稳均匀。

2自动清粪
免舍内空气的质量，事关到能否给免群提供- . 个舒适的生存环境，是至关重要的。目前，国内主要是采用水冲、刮板机和地沟配合清粪，有条件的工厂已经开始推广大型履带 式清粪，效果非常明显，舍内没有任何
气味，但是由于一一次性投入成本较高，直接影响到大范围推广，但不论采取那种形式，笼具的设计和安装必须与自动清粪匹配，才能达到净化空气的效果，目前一-部分规模化养殖场的清粪设备、笼具配套还存在不少缺陷。青岛康大食品有限公司的技术总监阎英凯先生在《肉兔工厂化养殖模式》一文中，不但给我们提出了风机和水帘的安装技术要领，同时对笼具的导粪板的倾斜度也提出了严格要求，不管是单层笼、双层笼或三层笼导粪板的倾斜度都必须达到45以 上，保证粪便自然滚落到粪尿沟中或落入履带之上。

3科学布局、综合规划
近几年，凡是具备条件的养兔企业和各类专业合作社，旧舍改造的不是很多，大部分是新场地新规划，新兔舍配套新笼具，切记在规划初期就做到不管新建规模大小或投资批次多少，一定要把集中饲养区、生活办公区、消毒隔离区、粪便排污区、粪便集中处理区同时进行规划。把饲养区内的净道、污道截然分开，风机、水市的安装位置和清粪机安装位置标明清楚，净道 (安装水帘)可以对列在一条通道内，但污道必须分开。因为排风机在工作时，不但是降温，调整兔舍内空气质量的同时也把舍内污浊气体、空中飞毛及室内产生的氨气同时排出。如果这栋兔舍的污浊气体又吹到另-栋兔舍里去了，就前功尽弃了。平时，免舍内除工人和管理人员外，是不允许闲杂人进出的，这就要求我们不但要有制度的保证，更要做到设计之初就把硬件设施同步跟上。
新型笼具配套新型兔舍，以其饲养效益的显著提升，工厂化管理的配套应用，养免产业的必然发展方向，先进养殖理念的具体体现已被越来越多的同业者认可，是大势所趋。胜顺畜牧器材有限公司周经理近几年去过不少地方，在帮助企业设计规划和近几年加工新型笼具的实践经验，浅薄地提出一些自己的见解，供同业者参考，很多不足之处，请专家学者及同行精英修正。